כל מה שרצית לדעת ולא העזת לשאול על גידול תאים ללא זיהומים!
ל מי שעסק בגידול תאים יודע שקשה מאוד להימנע לחלוטין מזיהומי תרביות תאים. עם זאת, עבודה זהירה והכשרה מתאימה יכולות להפחית באופן משמעותי את הסיכון לזיהום בתרבית שלך.מתוך ניסיון של מעל 8 שנים של גידול תאים, ריכזתי עבורך את הטיפים שלי שיעזרו לך במשימה!רחיצת ידיים לפני ואחרי הטיפול בכל תרבית תאים. תחנת שטיפת ידיים צריכה להיות נגישה בקלות בתוך המעבדה.יש לעבוד עם תרביות אך ורק בתוך מנדף ביולוגי.מומלץ למקם את האינקובטור עם תרביות התאים בחדר נפרד שיש בו תנועה מינימאלית.לפני תחילת הניסוי מומלץ לחטא את המנדף ע''י אורות. UV יש להפעיל את המנדף 15-20 דקות לפני תחילת עבודה.חשוב מאוד לנקות את אמבט חימום לעתים קרובות. חימום של בקבוקי מדיום וכימיקלים אחרים במי אמבט מהווה סיכון גבוה לזיהום התרבית.יש לחטא כל הבקבוקים המוכנסים למנדף עם אתנול.עדיף להשתמש בבקבוקי מדיום נפרדים לכל קו תאים. צעד חשוב זה מפחית גם את האפשרות של זיהום צולב עם קו תא אחר ומגביל את התפשטות הזיהום אם בקבוק בינוני הופך מזוהם. מומלץ מאד לחלק את כל התמיסות הסטריליות לכמויות קטנות. לדוגמא, טריפסין צריך להישמר בכמויות שימוש יחידה של 5 עד 10 מ"ל / מבחנה.כל החומרים הכימיים שבאים במגע עם התרביות חייבים להיות סטריליים.אין להעביר נוזלים סטריליים מכלי אחד לאחר. טיפות שנשארות על שפת הכלי יוצרות גשר בין הסביבה החיצונית, שאינה סטרילית לסביבה הסטרילית שבתוך הכלי.חשוב לגדל קו תאים אחד בלבד בכל פעם. ישנם סיכונים מהותיים של זיהום צולב בין תרביות תאים, כאשר קו תא אחד או יותר נמצא בשימוש באותו אינקובטור (Freshney, 2006)יש להימנע משימוש רציף ארוך טווח באנטיביוטיקה בתרביות תאים. שימוש יתר באנטיביוטיקה כטיפול מונע עלול להוביל להרעלה ומהווה סיכון מוגבר לזיהום ע''י מיקופלזמה סמויה בתוך שורות התאים.אין להשתמש באותה פיפטה עם קווי תאים שונים .(Freshney, 2006) כמו כן, אין להכניס פיפטה לאחר שימוש חזרה לבקבוק. פיפטציה כפולה חוסכת בפיפטות אבל מובילה לזיהום.אין להכניס את החלק הלא סטרילי של הפיפטור לתוך מדיום עם תאים.צריך לבדוק את התרביות מדי יום לסימנים של זיהום.אין להמשיך לעשות ניסויים בתרבית מזוהמת, אלא להוציא אותה מהאינקובטור מייד עם גילוי הזיהום.בברכת הצלחה בצלחת התרבית!אלונה
ליצירת קשר[email protected]
מחברת המאמר, מירב גרבי הינה בוגרת תואר ראשון בביולוגיה B.Sc. ותואר שני M.Sc. בביוכימיה מאוניברסיטת בר אילן.• למירב גרבי ניסיון של 3 שנים בעבודת מחקר במחלקה ל Cellular and Developmental Biology בביה"ס לרפואה New York, Mount Sinai School of Medicine • במסגרת עבודה זו חקרה את ההבדלים בין Fibroblast growth factors -FGFs לבין FGF homologous factors FHFs ע"י השריית מוטציה בחלבונים רקומביננטיים והכנה פרפרטיבית של החלבונים לאנליזה בקריסטלוגרפיה.• למירב מומחיות בשיטות: ביולוגיה מולקולרית, יצירת קונסטרקטים , RT-PCR, PCR טרנספקיות וטרנספורמציות, ביטוי חלבונים בחידקים, מיצוי חלבונים, טיהור חלבונים בקולונות אפיניות להפרין, ניקל וגלוטטיון, פתרון בעיות אגרגציה ופרסיפיטציה של חלבונים, אנליזת חלבונים בשיטת ווסטרן, צביעות קומסי וצביעות כסף של ג'לים, טרנספקציה לתרביות תאים, מבחני MTT לתרביות תאים ועוד.• מ - 2006- מנהלת את תחום מדעי החיים בחברת מרקורי לאחר שבמשך כעשור ניהלה גם את תחום הכרומטוגרפיה • מירב גרבי השתתפה בקורסים והשתלמויות בתחומים: כרומטוגרפיה, מיקרוסקופיה ומדעי החיים בחברת Merck .