בחירת הנוגדן הנכון לניסוי, יכולה להיות מאתגרת וקריטית לא פעם.חשוב לבחור את הנוגדן הנכון שיזהה את חלבון המטרה, שיהיה מספיק מדויק ורגיש וכן צריך לשים לב למידע שהיצרנים נותנים על הנוגדן. כשפיתוח הנוגדן נעשה ע"י החוקרים עצמם הם עורכים הרבה בדיקות איכות לנוגדנים על מנת שיוכלו להשתמש בנוגדן בבטחה, ובעקבותיהם, גם חברות שמיצרות נוגדנים עורכות בדיקות אלה. הצורך בבדיקות איכות ברמה גבוהה ובלידציות של נוגדנים יותר מוקפד באפליקציות קליניות ופחות בקהילת החוקרים. בהתחשב בעובדה שולידציות לנוגדנים יכולות להיות יקרות בזמן וכסף, הרבה יצרני נוגדנים ומעבדות החלו להגביל את מידת ההשקעה שלהם בבדיקות לנוגדנים חדשים שהם מיצרים.בעשור האחרון הולך וצומח טרנד שבו קהילת החוקרים וחברות מפתחות עורכות הערכה מחדש ליצור ולולידציה של נוגדנים על מנת שיהיו יותר מדויקים, וזאת כתוצאה מעליה במספר הפרסומים שלא אושרו בעקבות פענוח תוצאות בעבודה עם נוגדנים.בקהילה המדעית נדונה השאלה מי צריך להיות אחראי על הולידציות ובאיזה דחיפות עליהן להתבצע. ב-Science Journal תוארו 4 מאפיני מפתח שיש לבצע על מנת לדייק בואלידציות:
• Demonstrating sensitivity (precision)
• Demonstrating reproducibility (precision)
• Demonstrating target specificity (accuracy)
• Demonstrating application specificity (accuracy)
ארבעת המאפיינים האלו מגדירים איזו אנליזה נדרשת על מנת לקבל ולידציה איכותית לנוגדן.
קביעת השיטה המתאימה ביותר למחקר שלך
לכל שיטה (western blotting, immunohistochemistry, ELISA, flow cytometry, etc.,), יש יתרונות וחסרונות משלה. מכיון שלא כל נוגדן יכול להתאים לכל אחת מהשיטות, לא ניתן להחשיב נוגדן כלא טוב אם הוא עובד בIB ולא ב IH.חשוב מאוד לעשות ולידציה לנוגדן שלך לשיטה הספציפית שלך. מומלץ לבדוק את הנתונים המופיעים ב Data Sheet או באתר היצרן על מנת לראות איזה נתוני ולידציה ניתן לקבל על השיטה שבה מעוניינים. כל פרסום מדעי יכול לחזק את הבטחון בשימוש בנוגדן, וכן יכול לאיזה שיטות הנוגדן יכול להתאים.
היה ויש מספר פרוטוקולים קטן זה יכול להצביע על דיוק בנוגדן אך מצד שני על אי סבילות לשינויים בפרוטוקול.
קימים מספר נתוני מפתח חשובים אודות חלבון המטרה שיכולים להשפיע באופן משמעותי על ביצועי הנוגדן.
אלמנט נוסף בהצלחה בהליך ה immunostaining הינו התיחסות מראש לאופן הכנת הדוגמה.
לסיכום, כיול של נוגדנים הוא מפתח לביצוע נכון של ניסויים ולאחריהם לפרסום מאמרים עם נתונים מבוססים ונכונים. בכיול המעבדה בודקת את הביצועים של הנוגדן ומאפיינת את הביצועים שלו בשיטות השונות. תכנון נכון של ניסויים של יצרני הנוגדן ושל המשתמשים בו חשובים מאוד לפענוח נכון של התוצאות. בעבודה עם נוגדנים אנחנו מנצלים את אופי פעולתם המדויק, בוטחים בתכונות אלה ומתבססים עליהם בנסיונות שלנו. יחד עם זאת עלינו לכייל נכונה את הנוגדנים בהם אנחנו משתמשים ולהיות מודעים לחשיבות של תכנון נכון של ניסוי עם שימוש נכון בנוגדנים על מנת לפענח נכון את התוצאות של הניסויים שלנו. אשמח לעזור בבחירת הנוגדן למחקר שלך, מירב[email protected]
Reference:
Further considerations of antibody validation and usage. How to avoid reviewer challenges.By Kevin Long, Ph.D.; Chandra Mohan Ph.D.; Wayne Speckmann, Ph.D.
EMD Millipore Corporation, Billerica, MA, USA