על מנת לתת לכם פתרון קל, חכם ויעיל לריכוז חלבונים, Merck מפתחים את ליין המוצרים הפופולרי והידוע ביותר בקרב המדענים, Amicon® Ultra Centrifugal Filter Units.ה-Amicon מיועד לריכוז חלבון, הוא בנוי ממבחנה שבתוכה יש ממברנה המאפשרת הפרדה בין גדלים שונים של חלבונים. חלבונים אשר גדולים מגודל הפורות בממברנה לא יעברו אותה, בעוד חלבונים קטנים כן יעברו את הממברנה.
ישנם 2 פרמטרים שצריכים לדעת על מנת לבחור את ה-Amicon במקט המתאים:1. נפח ה-Amicon – מהו נפח הדוגמא שלך? לפי נפח הדוגמא נבחר את נפח ה-Amicon ממגוון הנפחים הבאים: 0.5 מ"ל, 2 מ"ל, 4 מ"ל, 15 מ"ל.2. Cut off ה-Amicon - מהו גודל החלבון שלך? לפי גודל החלבון נבחר את ה-cut off המתאים,מהאפשרויות הבאות: 3kDa, 10kDa, 30kDa, 50kDa, 100kDa.איך נבחר את ה-cut off? מאחר וזאת שאלה נפוצה – הקדשנו לשאלה זו את הסעיף הבא.
הדרך הקלה לבחור את ה-cut off המתאים, היא לפי גודל החלבון כמובן, פשוט לחלק את גודל החלבון ב- 2.לדוגמא אם יש חלבון בגודל 60kDa , נחלקו ב- 2, התוצאה היא 30kDaולכן הממברנה שנבחר היא 30kDa.בממברנה שה- cut off שלה הוא 30kDa, כל החלבונים שמעל 60kDa יישארו מעל הממברנהולכן גם החלבון שלנו שהוא בגודל 60kDa מאחר ופקטור הממברנה הוא 2.
ננופרטיקלס הם חלקיקים שגודלם לרוב הוא בין 20 עד 100 ננומטר,20 ננומטר שקול לגודל של כ- 500kDa. בגדלים כאלה נהוג לקחת ממברנה של 100kDa.בכל מקרה, כדאי להתייעץ איתנו – אפשר להתקשר לעדי – 054-2288744.
המפתחים של חברת Merck פרסמו מחקר מעניין בו הם בחנו את יעילות ה- cut offs השונים על אקסוזומים, ומצאו ש-10kDa הוא ה-cutoff הכי יעיל לריכוז אקסוזומים.להורדת המחקר – לחצו כאן
מבחנות ה- Amicon יכולות להחליף מבחנות דיאליזה שמטרתן היא החלפת בופר. בעוד שבמבחנות הדיאליזה לוקח זמן רב להחליף בופר, באמיקונים אפשר לעשות זאת בצורה מהירה יותר וכך לחסוך זמן.הדרך היא פשוטה – מוסיפים למבחנה את הבופר שרוצים ומבצעים סרכוז עד להחלפת הבופר. בסוף הסרכוז אפשר להוסיף בופר ושוב לסרכז או להשאיר את הדוגמא מהולה בבופר החדש בנפח הרצוי.לעוד מידע – ואיך לבחור - האם דיאליזה או החלפת בופר עם Amicon - לחצו על הקישור.
ה- Amicon שנבחר הוא 0.5 מ"ל ו- 100kDa, מקט UFC510024.
אפשרות נוספת: Microcon® DNA Fast Flow Centrifugal Filters– 100kDa מבחנה לניקוי שאריות SDS מדנ"א גנומי, בעלת ממברנה הוריזונטלית, מקט MRCF0R100
ל- User guide
לכל נפח של Amicon צנטריפוגה מתאימה.
Amicon 0.5ml – מתאים לצנטריפוגה של מבחנות 1.5 מ"ל.
Amicon 2ml – מתאים לצנטריפוגה של מבחנות 15 מ"ל.
Amicon 4ml – מתאים לצנטריפוגה של מבחנות 15 מ"ל.
Amicon 15ml – מתאים לצנטריפוגה של מבחנות 50 מ"ל.
מכיוון שיש סוגים שונים של צנטריפוגות (swinging bucket או fixed angle) ומכיון ש cut offs שונים דורשים מהירות סרכוז שונה, יש לעיין לפני השימוש במדריך למשתמש.
גם כאן, יש לעיין במדריך למשתמש של ה-Amicon המתאים. זמן הסרכוז לרוב משתנה כתלות ב-cut off , בחלבון הרצוי ובדוגמא. בתוך המדריך למשתמש יש טבלאות בהן אפשר להיעזר להתאמה מדויקת עבור החלבון שלך.
ניתן להוריד את טבלת העמידויות לחומרים פה, בעמוד 11 ניתן לראות את כל החומרים שנבדקו לממברנה של ה-Amicon. הממברנה היא regenerated cellulose (עמודה ראשונה).
ישנם חלבונים שהסרכוז משפיע עליהם, והם נוטים להיצמד לפלסטיק. במקרים כאלה, יש פרוטוקול שנקרא Passivation.אפשר להוריד אותו בקישור כאן
כמובן! בקישורים הבאים:Amicon-0.5Amicon-2Amicon-4Amicon-15
צרכים לרכז חלבונים בנפחים גדולים יותר?נשמח להציע לך את ה- Amicon® Stirred Cell
לשאלות נוספות, מוזמנים להתקשר אלינו:
לקו מומחי הביו שלנו - 03-7404206 טלפון ישיר - 03-740420603-9387164 שלוחה 206.
עדי ג'רבימנהלת מכירות יחידת מוצרי מעבדה054-2288744[email protected]
מחברת המאמר, עדי ג’רבי הינה בוגרת תואר ראשון בביולוגיה B.Sc. ותואר שני M.Sc. בביוטכנולוגיה מאוניברסיטת בר אילן.• עדי עובדת בחברת מרקורי משנת 2014 בצוות מדעי החיים. ויש לה ניסיון בבביולוגיה מולקולרית ובתחומים הבאים: Cloning, PCR, RNA extraction, RT-PCR, Protein extraction purification and concentration, Western blot, FACS, Cell culture, migration and invasion methods , 3D Organotypic culturing, Filtration solutions, Antibodies consulting, IP and chIP methods, Cell counting.• עדי גרבי השתתפה בקורסים והשתלמויות בתחומים: כרומטוגרפיה, מיקרוסקופיה ומדעי החיים .