נתחיל בסיפור לפני כמה חודשים הלכתי עם חברה טובה שהיא קולגה מצוות הביולוגיה שלנו למספר פגישות, אחת הפגישות הייתה באחת האוניברסיטאות הגדולות בארץ, עם סטודנטית שהתלוננה שנוגדן שקנתה לווסטרן לא עובד לה.הן עברו יחד על שלבי הניסוי, הכל על פניו נראה תקין, עד שנשאלה שאלת המחץ"באיזה מים השתמשתם להכנת הבופרים בהרצה..."? מסתבר שהמים נלקחו מכלי פלסטיק שהיה במעבדה ועל גביו רשום DDW.
מה הקשר באמת בין מים לשיטת Western blotting?
בווסטרן המים משמשים בשלבים רבים: להכנת בופר טרנספר, לתמיסת הבלוקינג, למיהול הנוגדנים ולתמיסות השטיפה. על מנת לקבל תוצאה ברורה של דטקציית החלבון, חשוב להשתמש במים נקיים מזיהומים.
במחלקת המו"פ של מחלקת Lab water solutions של חברת Merck, בדקו את הנושא לעומק וביצוע מספר ניסויים שמטרתם לבדוק את השפעת המים על שיטת ווסטרן.בגרף הבא מוצגות תוצאות ניסוי שבו בוצע אותו ווסטרן, עם אותם חומרים, כאשר בכל פעם הכנת כל הבופרים,בכל השלבים נעשתה עם סוג מים אחר, בכל ניסוי נבדקה רמת רעשי הרקע בכימילומינציה ונמצא כי המים המתאימים ביותר הם ultrapure עם פילטר סופי biopak.
בניסוי נוסף, בו שיטת ווסטרן שימשה לבדיקת חלבוני שוק חום מסוג HSP70, בדוגמאת ליזאט של כבד חולדות, השוו, באותם תנאים את איכות התוצאות כאשר מבצעים את הניסוי פעם אחת עם מים מבקבוק (חדש, שפתחו הרגע והסיכוי לזיהום בו אפסי), למים ממכשיר ®Milli-Q ופילטר סופי BIOPAK המבוסס על אולטרה-פילטרציה.מתוצאות הניסוי ניתן לראות באופן מובהק שעדיף להשתמש במים ממכשיר ®Milli-Q ופילטר סופי BIOPAK, לקבלת תוצאות ברורות ויפות יותר.
סוף דבר, אחרי ששלחנו לאותה סטודנטית את המידע מהניסויים האלו ומידע נוסף בנושא, היא ביצעה את הניסוי בשנית (עשתה בחכמה ששמרה עוד מהדוגמה), הפעם עם מים שלקחה בכלי נקי ממעבדה סמוכה שברשותה מערכת ®Milli-Q ופילטר סופי BIOPAK, והנוגדן עבד נפלא!
רוצים לדעת עוד? אשמח לשלוח לכם מידע נוסף על הקשר שבין מים לווסטרן פנו אליי ישירותבנוסף מזמינה אתכם לקרוא את הפוסטים המקצועיים של צוות הביו שלנו בנושא:הדרך הבטוחה לקבלת בנדים חדים - ג'לים מוכנים Precast gels - mPAGE Bis-Tris
עושים Western Blot אחרי IP?
בכל שאלה והתייעצות בדבר התאמה במעבדה שלכםאשמח שתפנו אלי
תכלת קובצ'י רבינוביץ,מנהלת תחום מערכות מים למעבדות במרקורי052-3632489[email protected]מחברת המאמר תכלת קובצ'י רבינוביץ בוגרת תואר ראשון B.Sc. ושני M.Cs בהנדסת ביוטכנולוגיה ומזון בטכניון.• במסגרת עבודת המחקר לתואר השני, הכירה ועבדה במגוון של טכנולוגיות מתחומי הכימיה והביולוגיה. מתחומי הכימיה, בעיקר סינתזת פפטידים solid phase peptide synthesis, HPLC אנליטי וסמי פרפרטיבי, כולל LCMS; מתחומי הביולוגיה עבודה עם חיידקים, MIC ובדיקת פיתוח עמידות לחומרים אנטי מיקרוביאלים, ומעט עבודה עם תרביות תאים.• תכלת עובדת במרקורי מ 2009 ומכירה היטב את צרכי הלקוחות בתחומים השונים, על פי אופי העבודה במעבדות השונות החל ממעבדות פארמה ועד למעבדות אקדמיה. בשנים 2009-2012 כמנהלת מכירות לתחומי הכימיה, בהמשך מ 2012 עד 2015 כמנהלת מכירות למוצרי מדעי החיים והחל מ - 2015 כ - Product specialist לתחום מערכות המים.• במהלך השנים כמנהלת מכירות השתלמה תכלת במגוון נושאים מקצועיים בתוך מרקורי, וכן מ - 2016 ועד היום משתלמת תכלת בקורסים מקצועיים המועברים במטה Merck Millipore בצרפת, בתחום המים למעבדות.בהשתלמויות אלו משתתפים מנהלי מוצרים מתחום המים למעבדות מכל העולם, תכלת אחראית להבאת הידע העדכני והרלוונטי ביותר ללקוחות בארץ